分析柱作为色谱分析技术的关键组件,凭借其精妙的工作原理,在多个领域展现出了其性能和广泛的应用价值。从液相色谱分析柱到糖分析柱,不同类型的分析柱针对不同性质的化合物,实现了准确的分离。
1.液相色谱分析柱:液相色谱分析柱实质上是一种分离柱,它在某些条件下会将待分离化合物分离并分解成组成相同的组分,分离过程是分子在固定相和流动相间的分配过程,流动相沿着固相表面吸附产生分离。液相色谱柱的固定相是微细的颗粒,具有高度的表面积,通过颗粒通道可以与流动相及待分离化合物交互作用,它们通过静电作用,疏水/亲水性原理,分子量筛选或手性选择等原理,将待分离的化合物分离出来。
2.糖分析柱:糖分析柱的分离原理主要基于配体交换反应。糖分子上的羟基可被去质子化而带有负电荷,这些负电荷与树脂表面上的金属离子(如钙、铅等抗衡离子)的正电荷之间相互作用,使糖被保留在固定相上。通过调节流动相条件(如pH值、离子强度等),可以实现不同糖类分子间的吸附与解吸平衡,从而达到分离的目的。此外,部分糖分析柱还结合了尺寸排阻、分配吸附等多种分离模式,进一步提高了分离效果。
分析柱的使用注意事项:
1.避免压力和温度的急剧变化及机械震动
-温度和压力的突然改变,以及机械震动,都可能破坏色谱柱内的固定相结构,影响分离效果。因此,在操作过程中应保持平稳的压力和温度条件,并防止强烈的机械冲击。
2.确保流动相洁净
-每隔24-48小时就应新配水相流动相,并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶,以避免流动相长菌。确保实验室纯水系统工作正常。
3.确保样品不含颗粒型杂质
-如样品过脏或有微粒存在,需要考虑适合的样品制备方法。在使用样品过滤器时,确保滤膜为0.22μm,且与样品溶剂兼容(不发生溶解)。也可考虑使用高速离心法去除颗粒性杂质。
4.注意样品溶液与流动相条件的兼容性
-进样后不应发生沉淀或溶剂不互溶的情况。通常使用流动相或比流动相洗脱强度弱的溶液(即有机溶剂比例较低)来溶解或稀释样品,这样可以获得优异的峰形和检测灵敏度。
5.了解色谱柱的操作使用限度
-如果所使用的流动相条件、柱温以及样品溶液条件不利于色谱柱寿命时,请使用保护柱以延长柱寿命。
6.定期进行柱效测试
-在色谱柱使用过程中,定期进行柱效测试,记录塔板数与压力,从而追踪监控色谱柱的性能变化。柱效测试方法应固定。
7.正确保存色谱柱
-反相色谱柱应保存于合适的高比例或100有机相(如乙腈或甲醇)中。如色谱柱使用于高温或PH条件,或停用色谱柱超过72小时,用100乙腈保存色谱柱。使用原配的柱堵头,确保堵头拧紧以避免柱内溶剂挥发。取放色谱柱时避免磕碰掉落。