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阿胶衍生物测定

 更新时间:2025-04-21 点击量:98

阿胶衍生物测定

阿胶HPLC测定主要用于氨基酸,特征肽等的成分分析。

色谱条件

色谱柱:MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流动相A: 0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5):乙睛=93.0:7.0

配制方法:准确称取无水醋酸钠8.203g于1000mL水中,搅拌均匀,使之溶解,用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50;准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL,混合均匀,抽滤过0.22µm滤膜;  

流动相B:水:乙腈=20.0:80.0

配制方法:准确量取水200mL和乙腈800mL,混合均匀,抽滤过0.22µm滤膜;

梯度方法:

梯度程序

流动相A 0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 6.50):乙睛=937

流动相B 水:乙腈=2080


T(min)                    A%                    B%

0.0                     100.0                          0.0

11                     93.0                   7.0

13.9                           88.0                    12.0

14                   85.0                           15.0

29                        66.0                          34.0

30                         0.0                    100.0

35                         0.0                    100.0

35.1                       100.0                     0.0  

45                    100.0                                           0.0

流 速1.0mL/min

柱 温:43

波 长:254nm

进样量:5μL

样品制备衍生过程

精密量取对照溶液5ml,加入25ml量瓶中,加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml,摇匀,室温放置1小时后,加入50%乙腈水至刻度,摇匀,取10ml,加正己烷10ml,振摇,放置10分钟。取下层溶液,过滤,取后续滤液,即得。

色谱图

1、样品衍生后

阿胶衍生物测定


2:取样品溶液1ml50%乙腈水稀释1倍。(由于衍生试剂浓度过大造成样品测定过载,形成峰分叉,样品稀释1倍后测定)

阿胶衍生物测定

阿胶衍生物测定

阿胶衍生物测定

结论:和曦生物的MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm的色谱柱可以实现对阿胶衍生后的样品进行测定。


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